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動(dòng)態(tài)中心 金標(biāo)卡板GICA技術(shù)既可以檢測抗原又可以檢測抗體,主要有:間接法、競爭法和夾心法,其中夾心法又分為雙抗原夾心法和雙抗體夾心法。
1、間接法 間接法一般用于抗體的檢測,其膠體金墊用待測抗體的多克隆抗體進(jìn)行包被,檢測線(T線)用待測抗體的抗原蛋白進(jìn)行包被,控制線(C線)用金標(biāo)抗體的二抗進(jìn)行包被。如一個(gè)陽性樣本進(jìn)行檢測,樣品中的抗體先與膠體金墊中的多克隆抗體結(jié)合,經(jīng)過檢測線時(shí)與檢測線上包被的抗原蛋白結(jié)合并不斷累積膠體金并顯色。多余的金標(biāo)多克隆抗體繼續(xù)前行與質(zhì)控線上包被的金標(biāo)抗體的二抗結(jié)合,不斷累積并顯色。T線和C線均顯色為陽性,T線不顯色、C線顯色為陰性,T線和C線均不顯色為無效。
2、競爭法 競爭法經(jīng)常用來檢測小分子抗原,其膠體金墊上吸附的金標(biāo)抗原或抗體和待測物與檢測線(T線)上包被的抗體或抗原進(jìn)行競爭性結(jié)合。如一個(gè)陽性樣本進(jìn)行檢測,待測物中的抗體與檢測線包被的抗體可競爭性結(jié)合金標(biāo)抗原表面有限的抗原位點(diǎn)。隨著待測物的增多,待測物與金標(biāo)抗原結(jié)合越多,便導(dǎo)致檢測線上包被的抗體無法和金標(biāo)抗原結(jié)合,則檢測線(T線)無法顯色。而質(zhì)控線(C線)上的二抗與抗原卻不存在競爭關(guān)系,金標(biāo)抗原層析到質(zhì)控線時(shí)與二抗結(jié)合并不斷累積而顯色。與間接法結(jié)果不同的是,T線和C線均顯色為陰性,T線不顯色、C線顯色為陽性,T線和C線均不顯色為無效。
3、雙抗體夾心法 常用來檢測抗原樣本,膠體金墊用待測物的單克隆抗體包被,檢測線(T線)用針對待測物另一位點(diǎn)的單克隆抗體包被,控制線(C線)用金標(biāo)抗體的二抗進(jìn)行包被。如一個(gè)陽性樣本進(jìn)行檢測,待測物同時(shí)與金標(biāo)抗體和檢測線單抗結(jié)合形成一個(gè)雙抗體夾心待測物(抗原)的大分子,這個(gè)大分子在檢測線上聚集并顯色,多余的金標(biāo)抗體繼續(xù)層析至控制線并與其包被的二抗結(jié)合而顯色。T線和C線均顯色為陽性,T線不顯色、C線顯色為陰性,T線和C線均不顯色為無效。
雙抗原夾心法與雙抗體夾心法的原理基本一致,只是膠體金墊和檢測線(T線)用已知的抗原進(jìn)行包被,主要用來進(jìn)行抗體的檢測。