金標(biāo)卡板GICA技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物疾病病原體細(xì)菌

　　豬鏈球菌有較強(qiáng)的致病性，可以引起豬腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、肺炎甚至突然死亡。同時(shí)也可感染人，引起敗血癥、中毒性休克綜合征和腦膜炎。因?yàn)榇瞬×餍袕V，發(fā)病人、豬的數(shù)量多，對(duì)公共衛(wèi)生和養(yǎng)殖業(yè)有的威脅。鞠瑩等建立了膠體金免疫層析法用于檢測(cè)豬鏈球菌2型的方法：用膠體金標(biāo)記豬鏈球菌2型多克隆抗體，制得膠體金免疫層析金標(biāo)卡板試紙條。結(jié)果表明，所研制的膠體金免疫層析金標(biāo)卡板試紙條的   低檢測(cè)限為100萬(wàn)CFU/mL，標(biāo)本處理簡(jiǎn)單，10min即可出結(jié)果。特異性方面僅與SS1/2有交叉反應(yīng)，與其它常見致病菌及鏈球菌屬中的15個(gè)群均無(wú)交叉反應(yīng)。而且通過對(duì)模擬樣品的檢測(cè)，其特異性和敏感性未受到改變。
　　劉洪貴等建立了一種檢測(cè)金黃色葡萄球菌的新方法：雙抗夾心法。該方法用膠體金標(biāo)記抗金黃色葡萄球菌凝集因子A重組蛋白特異性抗體，再用抗金黃色葡萄球菌IgG包被硝酸纖維素膜，制成免疫層析檢測(cè)試紙條。結(jié)果表明，敏感性為1萬(wàn)CFU/mL，但與PCR方法相比低一個(gè)數(shù)量級(jí)。與大腸桿菌、鏈球菌、李氏桿菌、巴氏桿菌及芽抱桿菌均無(wú)交叉，具有較好的特異性。
　　大腸桿菌O157是產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的主要血清型。志賀毒素是大腸桿菌O157的主要毒力因子之一，有Stx1和Stx2兩種生物型，分泌Stx2的毒力較強(qiáng)。高成秀利用大腸桿菌BL21獲得純化的融合蛋白，并多次免疫新西蘭大白兔，獲得重組Stx2B的多克隆抗體；同時(shí)制備了大腸桿菌O157單克隆抗體。采用雙抗夾心法分別制備了Stx2試紙條和大腸桿菌試紙條。用Stx2試紙條對(duì)58株已鑒定的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)，與Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)相比較，其陽(yáng)性檢出符合率為50%，顯色時(shí)間為5~10min；而大腸桿菌O157試紙條的檢測(cè)結(jié)果與凝集試驗(yàn)相比較，其陽(yáng)性檢測(cè)符合率為87.5%，檢測(cè)靈敏度為10萬(wàn)CFU/mL，顯色時(shí)間為3~5min。陽(yáng)性率的批內(nèi)變異系數(shù)為2.1%、批間變異系數(shù)為6.9%，這說明大腸桿菌O157金標(biāo)卡板試紙條的特異性、重復(fù)性和敏感性較好。但Stx2試紙條的陽(yáng)性檢測(cè)率和重復(fù)性還有待進(jìn)一步提高。
　　牛結(jié)核病是由分枝桿菌引起的人獸共患的慢性消耗性傳染病，世界衛(wèi)生組織推薦的檢測(cè)方法為結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，該檢測(cè)方法易出現(xiàn)假陽(yáng)性，即易受到非致病性分枝桿菌的干擾?，斚蜉x等建立了牛結(jié)核膠體金免疫層析診斷方法，用兔抗牛血清蛋白和大腸埃希菌表達(dá)的牛分枝桿菌MPB70-83-ESAT-6蛋白分別作為膠體金標(biāo)記抗原和檢測(cè)線上的捕獲抗原，制備了牛結(jié)核抗體檢測(cè)試紙條。結(jié)果顯示，所研制的試紙條不與牛副結(jié)核、牛巴貝斯病、口蹄疫和牛傳染性鼻氣管炎病陽(yáng)性血清作用，因此具有很好的特異性。另外，金標(biāo)卡板試紙條與TST的符合率為80%。